Introduction aux milieux de culture cellulaire classiques, comment choisir les milieux ?

De nombreux types de milieux de culture cellulaire classiques, tels que DMEM, RPMI 1640, MEM et DMEM/F12, sont les plus largement utilisés. D'autres, comme le milieu M199, IMDM et L15, sont également utilisés pour cultiver certaines cellules. Les caractéristiques et applications de ces milieux de culture cellulaire sont les suivantes.

1. Milieu de culture cellulaire BME

Le milieu Basic Eagle a été conçu par Eagle en 1955, contenant BSS + 12 types d'acides aminés + glutamine + 8 types de vitamines. Il est simple, facile à ajouter et adapté à diverses lignées cellulaires passées et à une utilisation de recherche spéciale, sur la base desquelles les variétés améliorées de milieu de culture cellulaire sont MEM, DMEM, IMDM, etc.

2. Milieu de culture cellulaire MEM

Ceci est amélioré sur le milieu basique d'Eagle (BME) en 1959, la lysine et la biotine ont été éliminées et la concentration en acides aminés a été augmentée. Cependant, en raison de sa teneur limitée en éléments nutritifs, ce n'est pas nécessairement le meilleur milieu pour la culture cellulaire spécifique à la production.

3. Milieu de culture cellulaire DMEM

Le DMEM est un milieu Eagle modifié par Dulbecco, initialement conçu pour les fibroblastes de souris. Le DMEM a deux fois la concentration en acides aminés du MEM, quatre fois la concentration en vitamines du MEM et utilise le double de la concentration en HCO3 et CO2 pour un meilleur tampon. La formulation originale contenait 1000 mg/L de glucose, qui a ensuite été ajustée à 4500 mg/L pour la croissance de certaines cellules, souvent appelées glucose bas et haut.

Une faible teneur en sucre convient à la culture de cellules adhérentes dépendantes, en particulier à la culture de cellules tumorales avec un taux de croissance rapide et une faible adhérence. Le sucre élevé convient mieux à la culture cellulaire en suspension à haute densité, à la culture clonale avec une mauvaise fixation mais ne veut pas qu'elle soit détachée du point de croissance d'origine, et à la culture de cellules de myélome et de cellules transformées transfectées avec de l'ADN dans l'hybridome.

4. Milieu de culture cellulaire IMDM

Guilber et Iscove ont modifié le milieu de Dulbecco en milieu d'Iscove pour la culture d'érythrocytes et de précurseurs de macrophages. Le milieu de culture cellulaire IMDM contient du sélénium, des acides aminés et des vitamines supplémentaires, du pyruvate de sodium et de l'HEPES et remplace le nitrate de fer par du nitrate de potassium.IMDM favorise également la croissance des lymphocytes B de souris, des cellules B stimulées par le LPS, des cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse, des cellules T, et les cellules de lymphome. L'IMDM est un milieu de culture très riche en nutriments et peut être utilisé pour la prolifération rapide de cellules à haute densité.

5. Milieu de culture cellulaire RPMI-1640

Développé par Moore et al. au Roswell Park Memorial Institute en 1967, il est conçu pour la culture des lymphocytes et contient du BSS + 21 types d'acides aminés + 11 types de vitamines. Il est maintenant également utilisé pour la culture de cellules en suspension, telles que les cellules de mammifères, les cellules hématopoïétiques spéciales, les leucocytes normaux ou à prolifération maligne et les cellules d'hybridome. D'autres lymphocytes adultes tels que K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, les cellules de lymphome à cellules T et les cellules épithéliales HCT-15 peuvent être utilisés à titre de référence.

6. Milieu de culture cellulaire HamF10

1963 Ham design, contenant des oligo-éléments, peut être utilisé lorsque la teneur en sérum est faible, adapté à la culture clonée. f10 convient au hamster et aux cellules diploïdes humaines, particulièrement adaptées à la culture cellulaire du liquide amniotique.

7. Milieu de culture cellulaire DMEM/F12

Ham's F12 est conçu pour le clonage de cellules CHO à faible concentration sérique et est maintenant largement utilisé dans l'analyse du taux de formation de clones et de la culture primaire. Le F12 peut également être utilisé avec du DMEM et d'autres volumes pour obtenir une concentration et une composition élevées de divers produits. Ce milieu a été appliqué à de nombreuses cultures primaires, et plus difficile à élever à la culture de lignées cellulaires. Il est également souvent utilisé comme milieu de base pour les cultures sans sérum en raison de sa richesse en nutriments et de sa capacité à utiliser moins de sérum.

8. Milieu de culture cellulaire M199

Le milieu M-199 est un milieu de culture cellulaire de composition chimique définie conçu par Morgan et al. en 1950. Il contient 53 composants en plus du BSS et est un milieu complet utilisé principalement pour la culture de fibroblastes d'embryons de poulet. Le milieu m-199 doit être complété par le sérum pour soutenir la culture à long terme. Il peut être utilisé pour cultiver des cellules de nombreuses espèces d'origine et peut cultiver des cellules transfectées, et est maintenant largement utilisé pour la virologie et la production de vaccins.

9. Milieu McCoy5A

Le milieu McCoy5A est un milieu de culture cellulaire conçu par MeCoy en 1959 pour les cellules de sarcome et contient du BSS et 40 autres composants. Il peut soutenir la croissance de divers greffons primaires (tels que la moelle osseuse, la peau, les poumons et la rate) et est principalement utilisé pour la culture de biopsie tissulaire, certaines cultures de lymphocytes et le soutien de la croissance de certaines cellules difficiles à cultiver, en plus du primaire général. culture cellulaire - par exemple, fibroblastes de sarcome de rat de Jensen, lymphocytes humains, HT-29, BHL-100 et autres cellules épithéliales.

10. Milieu de culture cellulaire L15

Le milieu de culture L-15 convient à la culture de cellules tumorales à prolifération rapide et est utilisé pour cultiver des lignées cellulaires tumorales en l'absence de CO2. Ce milieu de culture utilise un système de tampon phosphate avec une composition en acides aminés encore améliorée et du glucose remplacé par du galactose.

Comment choisir un milieu de culture cellulaire ?

1. Vous pouvez consulter la littérature de référence ou la consulter lorsque vous achetez des lignées cellulaires. Vous pouvez également effectuer une recherche sur les sites Web de certaines sociétés biologiques, telles que le site Web Invitrogen, qui dispose d'un outil de base de données de lignées cellulaires. Sélectionnez le type de cellule qui vous intéresse, et il apparaîtra les milieux recommandés, le sérum et les réactifs de transfection, etc., parfois avec des étapes de transfection optimisées, ce qui est très pratique.
2. Vous pouvez également vous référer aux supports habituels utilisés dans d'autres laboratoires, dont beaucoup conviennent à la culture de plusieurs cellules.
3. Choisissez le support en fonction des caractéristiques de la lignée cellulaire et des besoins de l'expérience. Par exemple, les lignées cellulaires de souris sont principalement sélectionnées RPMI1640.
4. Utilisez divers supports pour cultiver les cellules cibles et observez leur état de croissance. Vous pouvez utiliser la courbe de croissance, le taux de formation de colonies et d'autres indicateurs pour juger, en fonction des résultats expérimentaux, de sélectionner le meilleur milieu, qui est la méthode la plus objective mais la plus fastidieuse.