Milieu de culture MEM (milieu essentiel minimum)

Le milieu de culture MEM (Minimum Essential Medium) est également appelé Minimum Essential Medium, Minimum basic Medium ou Low limited Eagle Medium. Il est développé par Harry Eagle sur la base d'Eagle basic Medium (BEM). C'est l'un des supports les plus basiques et les plus applicables avec la gamme la plus large. C'est l'un des milieux les plus couramment utilisés dans la culture de cellules animales, notamment HeLa, BHK-21, 293, HEP-2, HT-1080, McF-7, les fibroblastes et les astrocytes primaires de rat. Le milieu de culture MEM ne contient que 12 acides aminés essentiels, de la glutamine et 8 vitamines. Il est de composition simple et principalement utilisé pour la culture de cellules adhérentes. Après modification de la formule, il peut également être utilisé pour la culture d'autres types de cellules.

Ingrédients du milieu de culture MEM

L-glutamine (Glutamine)

La L-glutamine (Glutamine) est un élément nutritif essentiel dans la culture cellulaire, mais elle est instable en solution et se dégrade spontanément. La quantité de L-glutamine peut être arbitrairement ajustée en fonction des besoins de recherche du milieu sans L-glutamine, et l'ajout de L-glutamine fraîche ou de ses substituts au moment de l'utilisation est plus bénéfique pour la croissance cellulaire.

La L-alanyl-L-glutamine (Ala-Glu), également connue sous le nom d'alanyl-glutamine et d'alanyl-glutamyl dipeptide, est un additif de culture cellulaire avancé qui peut remplacer directement la L-glutamine dans le milieu de culture cellulaire. La l-glutamine est un nutriment essentiel dans la culture cellulaire, mais elle est instable en solution et sera cependant instable en solution et se dégrade spontanément pour produire de l'ammoniac et de l'acide pyroglutamique, dont l'ammoniac est nocif pour les cellules, alors que la L-alanyl- La L-glutamine est très stable en solution aqueuse et ne se dégrade pas spontanément. Le mécanisme d'utilisation cellulaire est que pendant la culture cellulaire, les cellules libèrent progressivement une peptidase dans le milieu de culture pour hydrolyser le L-alanyl-L-glutamyle en L-alanine et L-glutamine, puis les cellules absorbent et utilisent ces deux hydrolyses. des produits. Le processus d'utilisation cellulaire du L-alanyl-L-glutamyl est similaire à la stratégie de culture par addition en flux, en ce que de faibles niveaux de L-glutamine sont continuellement ajoutés au milieu de culture, augmentant ainsi l'utilisation de la L-glutamine sans générer d'excès. l'ammoniac, qui est plus propice à la croissance cellulaire. Le L-alanyl-L-glutamyl peut remplacer la L-glutamine équimolaire, convient à toutes les cellules, nécessite peu d'adaptation et peut prolonger le temps de culture cellulaire. Il peut également prolonger le temps de culture cellulaire et réduire le nombre de passages, ce qui permet d'économiser du temps et de l'argent. Les cellules cultivées dans un milieu additionné de L-glutamine ont montré une réduction d'activité plus lente que celles cultivées dans un milieu additionné de L-glutamine. La période de retard légèrement plus longue est due au temps nécessaire à la libération de la peptidase et à la digestion du dipeptide.

NEAA (acides aminés non essentiels)

Les NEAA (acides aminés non essentiels), qui sont 7 NEAA de L-alanine, d'acide L-glutamique, de L-asparagine, d'acide L-aspartique, de L-proline, de L-sérine et de glycine ajoutés au milieu MEM, peuvent réduire le côté effets de la production propre des cellules d'acides aminés non essentiels pendant la culture cellulaire et favorisent efficacement la prolifération et le métabolisme cellulaires.

Le glucose peut être ajusté à volonté selon les besoins de la recherche, ce qui est pratique et rapide. Le milieu de type à haute teneur en sucre est couramment utilisé pour les cellules à croissance rapide à faible adhérence, les cellules de myélome d'hybridome, les cellules clonales, les cellules transformées de transfection d'ADN, diverses cellules hôtes de virus primaires, la culture de cellules individuelles et la production de vaccins, telles que l'utilisation de Cellules CHO pour exprimer l'EPO et production de vaccin contre l'hépatite B. Le milieu à faible teneur en sucre convient mieux à la culture de cellules dépendantes de l'adhérence et à métabolisation plus lente.

L'HEPES est un excellent tampon biologique, qui n'a aucun effet toxique sur les cellules. Le milieu avec HEPES peut maintenir une plage de pH constante pendant une plus longue période, ce qui peut empêcher efficacement la croissance cellulaire d'être affectée par de grandes fluctuations de pH du milieu de culture. Il peut être utilisé dans des incubateurs sans CO2.

Le rouge de phénol est utilisé comme indicateur de pH dans le milieu de culture pour surveiller en continu le pH du milieu de culture. Le rouge de phénol rend le milieu de culture jaune à un pH bas et violet à un pH plus élevé et rouge à un pH de 7.2 à 7.4, ce qui convient le mieux à la culture cellulaire. Cependant, le rouge de phénol présente également certains inconvénients. Des études ont montré que le rouge de phénol peut imiter les effets des hormones stéroïdes (en particulier les œstrogènes), donc lors de l'utilisation de cellules sensibles aux œstrogènes (comme le tissu mammaire), il est préférable d'utiliser un milieu sans rouge de phénol. Le rouge de phénol peut interférer avec la détection lors de l'analyse par cytométrie en flux. De plus, la présence de rouge de phénol dans certaines formulations de milieu sans sérum peut interférer avec l'équilibre sodium-potassium.

Solution de pénicilline-streptomycine

La solution de pénicilline-streptomycine, également appelée «antibiotique double», est l'antibiotique le plus couramment utilisé dans la culture in vitro pour prévenir la contamination microbienne, dans laquelle la pénicilline interfère avec la synthèse de la paroi cellulaire bactérienne et est particulièrement efficace contre les bactéries Gram-positives, tandis que la streptomycine inhibe la synthèse des protéines bactériennes en se liant à la sous-unité 30S du ribosome bactérien et est particulièrement efficace contre la streptomycine se lie à la sous-unité 30S du ribosome bactérien et inhibe la synthèse des protéines bactériennes, qui est efficace contre les bactéries Gram-négatives et Gram-positives, mais est particulièrement efficace contre les bactéries Gram-négatives. La combinaison de pénicilline et de streptomycine peut prévenir la plupart des contaminations bactériennes.

Ce produit contient des acides aminés, des vitamines, des sels inorganiques et de nombreux autres composants nécessaires à la culture multiple de cellules, mais ne contient pas de protéines, de lipides ou de facteurs de croissance. Le produit doit donc être utilisé avec du sérum ou des additifs sans sérum.

Précautions

Ce produit a été filtré et débactérisé et doit être utilisé avec précaution pour un fonctionnement aseptique afin d'éviter toute contamination.
Ne pas congeler-décongeler le produit afin de conserver la meilleure utilisation du produit.
Ce produit est destiné à la recherche scientifique ou à des études ultérieures uniquement, et non à des fins de diagnostic ou de traitement.