Milieu de culture DMEM en poudre

Le DMEM est développé sur la base du support MEM. Par rapport au milieu MEM, la teneur en acides aminés a augmenté de 2 fois et la teneur en vitamines a augmenté de 4 fois. En même temps, des acides aminés non essentiels, des traces d'ions fer et du pyruvate de sodium ont été ajoutés. Le milieu DMEM a été initialement conçu avec une teneur en glucose de 1000mg/L (type à faible teneur en sucre), et a ensuite développé une teneur en glucose de 4500mg/L (type à haute teneur en sucre), qui a été largement utilisé dans la culture de diverses cellules. Le milieu de culture à haute teneur en glucose est largement utilisé dans les cellules à croissance rapide à faible adhérence, les cellules de myélome d'hybridome, les cellules clonées, les cellules transformées transfectées par l'ADN, les cellules hôtes de divers virus primaires, la culture monocellulaire et la production de vaccins, telles que l'expression cellulaire CHO de Production d'EPO et de vaccins contre l'hépatite B. Le milieu pauvre en glucose est plus adapté à la culture de cellules à métabolisme plus lent, dépendantes de l'adhérence. Le milieu sans glucose peut ajuster la concentration de glucose à volonté en fonction des besoins de la recherche, ce qui est pratique et rapide. Le DMEM ne contient pas de protéines, de lipides ou de facteurs de croissance. Par conséquent, le DMEM doit être complété par des nutriments, généralement avec 10 % de sérum bovin fœtal (FBS). Le DMEM utilise un système tampon de bicarbonate de sodium (3.7 g/L) et nécessite donc un environnement de 5 à 10 % de CO2 pour maintenir le pH physiologique. Pour une large gamme d'applications de culture cellulaire, nous proposons des milieux DMEM modifiés avec divers composants, ainsi que des milieux DMEM avec des composants personnalisables.

Ingrédients du milieu de culture DMEM en poudre

Ce milieu de culture cellulaire en poudre sèche DMEM doit être complété avec du bicarbonate de sodium, pH ajusté et filtré pendant la préparation. La formulation détaillée est la suivante :

1. Ajouter 950 ml d'eau distillée dans un récipient de mélange aussi près que possible du volume final.
2. Ajouter le milieu en poudre sec à l'eau à température ambiante (15°C à 30°C) et agiter doucement. Ne chauffez pas l'eau.
3. Rincez l'intérieur du pack pour éliminer tout résidu de poudre.
4. Ajouter 50 mL de solution de NaHCO75 à 3 g/L au milieu de culture.
5. Ajuster le pH à 0.2 à 0.3 unités en dessous du pH de travail final souhaité en ajoutant lentement et en agitant NaOH 1 N ou HCl 1 N. Le pH peut augmenter de 0.1 à 0.3 unité après filtration. Le pH de travail recommandé est de 7.0 à 7.4.
6. Utilisez de l'eau distillée pour ajuster le volume final.
7. Traiter immédiatement le milieu de culture à travers une membrane filtrante de 0.2 µm dans des récipients stériles à l'aide d'un système de filtration à pression positive.