Milieu essentiel minimum en poudre (MEM)

Le RPMI-1640 est un milieu 5A amélioré de McCoy, et il a un effet unique par rapport aux autres milieux car il contient l'agent réducteur glutathion et une concentration élevée de vitamines. Le RPMI 1640 contient de la biotine, de la vitamine B12 et du PABA, qui ne se trouvent pas dans le MEM et le DMEM d'Eagle. De plus, le milieu contient des concentrations très élevées des vitamines inositol et choline. Le milieu RPMI 1640 s'est avéré adapté à une variété de cellules de mammifères, y compris les cellules HeLa, les cellules jurkat, les cellules MCF-7, les cellules PC12, les cellules PBMC, les astrocytes et les cellules cancéreuses. C'est l'un des milieux les plus largement utilisés.RPMI 1640 le milieu ne contient pas de protéines, de lipides ou de facteurs de croissance. Ainsi, il nécessite généralement 10 % de sérum bovin fœtal (FBS) comme supplément. Le RPMI 1640 utilise un système tampon de bicarbonate de sodium (2.0 g/L) et nécessite donc un environnement de 5 à 10 % de CO2 pour maintenir le pH physiologique. Pour une large gamme d'applications de culture cellulaire, nous proposons le milieu modifié RPMI 1640 avec divers composants et le milieu RPMI 1640 avec des composants personnalisables.

Ingrédients du milieu RPMI-1640 en poudre

Ce milieu de poudre sèche RPMI-1640 doit être complété avec du bicarbonate de sodium, un pH ajusté et filtré lors de la préparation. La méthode de formulation détaillée est la suivante :

1. Ajouter 950 ml d'eau distillée dans un récipient de mélange aussi près que possible du volume final.
2. Ajouter le milieu sec à l'eau à température ambiante (15°C à 30°C) et agiter doucement. Ne chauffez pas l'eau.
3. Rincez l'intérieur du pack pour éliminer tout résidu de poudre.
4. Ajouter 29.3 ml de solution de NaHCO75 à 3 g/L au milieu.
5. Ajuster le pH à 0.2 à 0.3 unités en dessous du pH de travail final souhaité en ajoutant lentement et en agitant NaOH 1 N ou HCl 1 N. Le pH peut augmenter de 0.1 à 0.3 unité après filtration. Le pH de travail recommandé est de 7.1 à 7.4.
6. Ajuster le volume final avec de l'eau distillée.
7. Traiter immédiatement le milieu à travers la fonction de filtration sur membrane d'un filtre de 0.2 μm dans un récipient stérile à l'aide d'un système de pression positive.