Qu'est-ce que la quantification par fluorescence

La quantification de la fluorescence fait référence à une méthode utilisée pour mesurer la quantité ou la concentration d'une substance (telle que l'ADN, l'ARN, les protéines ou d'autres molécules) en fonction de sa capacité à émettre de la fluorescence. Cette technique exploite la propriété de certaines molécules de devenir fluorescentes lorsqu’elles sont exposées à des longueurs d’onde spécifiques de lumière. Voici quelques applications courantes de la quantification par fluorescence :

1. Quantification de l’ADN et de l’ARN :

• Les colorants fluorescents comme PicoGreen ou SYBR Green se lient aux molécules d'ADN ou d'ARN, les rendant fluorescentes.
• L'intensité de la fluorescence émise est proportionnelle à la quantité d'ADN ou d'ARN présente, permettant une mesure quantitative.

1. Quantification des protéines :

• Les colorants fluorescents tels que la fluorescéine ou les colorants Cy peuvent se lier à des protéines ou à des étiquettes protéiques.
• L'intensité de la fluorescence est en corrélation avec la concentration des protéines, permettant la quantification.

1. Tests cellulaires :

• Des sondes ou colorants fluorescents peuvent être utilisés pour mesurer des composants ou des activités cellulaires spécifiques (par exemple, les niveaux d'ions calcium, les changements de pH).
• Les changements d'intensité de fluorescence indiquent des changements dans la concentration ou l'activité des molécules cibles.

Méthodologie:

• Courbe standard : Pour quantifier la molécule cible avec précision, une courbe standard est souvent générée en utilisant des concentrations connues de la molécule d'intérêt. Cette courbe relie l'intensité de la fluorescence à la concentration.
• Mesure de fluorescence : Les mesures sont généralement effectuées à l'aide de fluoromètres ou de lecteurs de plaques équipés de capacités de détection de fluorescence. Ces instruments émettent des longueurs d’onde de lumière spécifiques pour exciter les fluorophores, puis mesurent la fluorescence émise.

Avantages:

• Sensibilité: La détection par fluorescence est très sensible, permettant la détection de faibles concentrations de molécules.
• Spécificité: Les colorants fluorescents peuvent être choisis pour se lier spécifiquement aux molécules cibles, minimisant ainsi les interférences de fond.
• Quantitatif: L'intensité de la fluorescence fournit une mesure directe de la quantité de molécule cible, permettant une quantification précise.

Applications :

La quantification par fluorescence est largement utilisée dans divers domaines tels que la biologie moléculaire, la biochimie, le diagnostic clinique et la découverte de médicaments. Il facilite la mesure et l’analyse précises des biomolécules et des processus cellulaires, contribuant ainsi aux progrès de la recherche et du diagnostic.