Comment prévenir la contamination par les aérosols dans les laboratoires de PCR

L'application et le développement de la technologie PCR (réaction en chaîne par polymérase) ont conduit à des preuves plus efficaces pour le diagnostic des maladies, en particulier la promotion et l'application de la PCR quantitative fluorescente, qui a considérablement amélioré la sensibilité et la précision du test. Cependant, avec la généralisation de cette technologie dans les laboratoires de détection d'agents pathogènes, le problème de la contamination par les aérosols dans les laboratoires de PCR a progressivement suscité l'inquiétude. Afin d'éviter efficacement la contamination par les aérosols d'ADN / ARN du laboratoire PCR, d'obtenir des résultats de test stables et fiables, d'éviter les faux positifs, le laboratoire PCR doit établir des mesures anti-pollution strictes et le système de surveillance de la pollution correspondant pour prévenir la contamination par aérosol pollution, une fois trouvé aérosol contamination, pour trouver rapidement la cause et la solution correspondante au problème de pollution.

Zonage des laboratoires

Le laboratoire de PCR doit être divisé en quatre sections conformément aux réglementations en vigueur : section de préparation des réactifs, section de préparation des échantillons, section d'amplification PCR et section d'analyse des produits, les deux premières sections étant la section de préamplification et les deux dernières sections étant la section partie post-amplification. La zone de pré-amplification et la zone de post-amplification doivent être strictement séparées et équipées d'une ventilation et d'une purification pour former une différence de pression entre les sections. Le flux de travail, y compris les matériaux expérimentaux, les réactifs, le papier d'enregistrement, les stylos, les matériaux de nettoyage, etc., ne peut passer que de la zone de pré-amplification à la zone de post-amplification, c'est-à-dire de la zone de préparation des réactifs → zone de traitement des échantillons → zone d'amplification → produit zone d'analyse et ne doit pas s'écouler en sens inverse. Il est strictement interdit d'inverser le flux dans le couloir propre tout en formant des différences de gradient de pression différentes entre chaque section, pièce tampon correspondante et couloir propre afin que le flux d'air soit le même que la direction de travail.

Configuration des contrôles

Deux contrôles négatifs (utilisant tous deux l'eau comme matrice, l'un avec l'échantillon impliqué dans l'extraction d'acide nucléique et l'autre non impliqué dans l'extraction, ajouté uniquement lors de la configuration du système d'amplification) sont préparés à chaque fois avant de réaliser l'expérience, afin de contrôler la contamination par aérosol dans le laboratoire et déterminer s'il y a contamination et ce qui la cause, afin que des mesures puissent être prises pour la prévenir et l'éliminer. Un contrôle positif doit également être défini pour surveiller la fiabilité et l'exactitude des résultats expérimentaux.

Surveillance des aérosols de laboratoire

L'air du laboratoire est régulièrement purifié à l'aide d'un purificateur d'air domestique, et le filtre du purificateur est plongé dans l'eau, mélangé, et l'eau mélangée est utilisée comme échantillon pour les tests correspondants afin de se tenir au courant de la contamination des aérosols dans l'air. Prélevez régulièrement des échantillons de cotons-tiges à l'intérieur et à la surface des pistolets à pipette, des extracteurs, des amplificateurs et d'autres instruments à tester afin de comprendre la contamination dans les instruments expérimentaux.

Flux de travail strict

Chaque section du PCR est équipée de ses propres vêtements de travail, qui se distinguent par la couleur, et les vêtements de travail correspondants doivent être changés lors de l'entrée dans chaque section ; pendant ce temps, l'entrée du couloir propre est équipée de chaussures spéciales pour la salle PCR, qui doivent être changées en entrant, et des tapis de feutre sont équipés devant chaque section. Le personnel de laboratoire dans le couloir propre ne peut aller que de la direction de la zone de préparation des réactifs à la direction de la zone d'analyse des résultats, et chaque section est équipée d'un personnel différent pour fonctionner si les conditions le permettent, afin d'éviter que le personnel de chaque section se déplaçant les uns autour des autres.

Améliorer le nettoyage et la désinfection

Un bon nettoyage et désinfection du laboratoire est un moyen efficace de prévenir la contamination par les aérosols dans le laboratoire. Le périmètre du nettoyage de laboratoire comprend le nettoyage des surfaces de travail (bancs d'essais, bancs ultra-propres et armoires de stockage, etc.), des surfaces d'instruments et d'équipements (têtes tournantes de centrifugeuses, blocs chauffants pour l'extraction d'ADN, fentes d'échantillonnage des amplificateurs, pipettes tiges de pipetage, fentes d'enfichage des analyseurs génétiques, etc.), outils ou ustensiles réutilisés, etc.

Avant et après le début de l'expérience, les surfaces des zones et des instruments mentionnés ci-dessus sont essuyées à plusieurs reprises avec une solution d'hypochlorite de sodium à 10 % fraîchement préparée, puis frottées avec de l'éthanol à 75 % pour éliminer les résidus, et l'expérience ne peut être effectuée qu'après l'alcool s'est évaporé. Cela peut éliminer efficacement les divers polluants attachés à leurs surfaces. Parallèlement, le laboratoire est régulièrement désinfecté par irradiation aux rayons UV.