Réaction en chaîne par polymérase, enzymes PCR courantes

La PCR (réaction en chaîne par polymérase) est une technique couramment utilisée pour amplifier des molécules d'ADN in vitro, et les enzymes PCR sont un élément clé de cette réaction. Les principaux types d'enzymes PCR comprennent la Taq polymérase, la Pfu polymérase et les variantes à démarrage à chaud de la Taq. ADN polymérase.

Taq polymérase

La Taq polymérase a été l’une des premières enzymes PCR à être largement utilisée. Il a été isolé d’une bactérie connue sous le nom de Thermus Aquaticus et possède une excellente résistance à la chaleur. La Taq polymérase est stable à haute température et convient aux étapes de dénaturation, d'hybridation et d'extension de la PCR. Cependant, la Taq polymérase souffre d’un taux d’erreur élevé dans les régions à forte teneur en GC car elle ne dispose pas de la fonction de correction de l’exonucléation 3′-5′.

Polymérase Pfu

La polymérase Pfu est isolée des cyanobactéries thermophiles et présente une résistance thermique supérieure à celle de la polymérase Taq. Il dispose d'une fonction de correction des exonucléotides 3′-5′, ce qui lui confère un taux d'erreur plus faible et génère des produits d'amplification plus précis lors de l'amplification de régions à forte teneur en GC.

Variantes à démarrage à chaud de l'ADN polymérase Taq

Étant donné que la Taq polymérase doit être activée à des températures plus élevées, des produits non spécifiques peuvent être produits au début de la réaction PCR. Pour surmonter ce problème, des enzymes PCR à démarrage à chaud ont été introduites, dont une variante inactive à basse température et activable à haute température. Cela contribue à réduire la formation de produits non spécifiques dans les premiers stades de la réaction PCR, améliorant ainsi la spécificité.

Étant donné que la Taq polymérase doit être activée à des températures plus élevées, des produits non spécifiques peuvent être générés au début de la réaction PCR. Pour surmonter ce problème, des enzymes PCR à démarrage à chaud ont été introduites, dont une variante inactive à basse température et activable à haute température. Cela contribue à réduire la formation de produits non spécifiques dans les premiers stades de la réaction PCR, améliorant ainsi la spécificité.