Quel est le liquide dans le milieu de transport du virus ? Pourquoi est-il rouge ?

Le test d'acide nucléique, comme son nom l'indique, est la collecte d'acides nucléiques (en utilisant des écouvillons nasaux ou oropharyngés) puis une amplification par PCR pour détecter la présence d'une séquence cible afin de déterminer si une espèce est présente. Depuis l'épidémie de Covid-19, cette technologie a progressivement été dans l'œil du public.

Une fois l'échantillon biologique prélevé, il est primordial de s'assurer que l'acide nucléique est conservé intact. Cependant, comme les bactéries, les cellules exfoliées et d'autres composants sécrétoires peuvent avoir des ingrédients actifs qui catalysent le clivage de l'acide nucléique. En particulier, le matériel génétique du Covid-19 est l'ARN, qui est plus faible que l'ADN et plus facile à lyser.

Par conséquent, le milieu de transport viral (VTM) n'a qu'une seule mission : conserver intact le matériel génétique de l'échantillon à tester. Il peut être divisé en deux milieux de transport selon qu'il est inactivé ou non.

Milieu de transport inactivé

La méthode la plus simple consiste à tuer tous les virus et cellules et à inhiber toutes les ARN hydrolases potentielles. Par exemple, les tensioactifs/sels de lyse sont utilisés pour détruire la structure membranaire des virus/cellules afin que les protéines virales perdent leur activité physiologique. Les enzymes sont inhibées avec des sels de guanidine (par exemple, l'isothiocyanate de guanidine) pour protéger l'acide nucléique, similaire au lysat d'extraction d'acide nucléique (réactif TRIzol). Il est couramment utilisé pour les tests biologiques de routine afin d'éviter le risque d'infection par aérosol par des virus transmissibles.

Type d'inactivation par lyse sans guanidine : Un agent dénaturant des protéines sans sel de guanidine est ajouté, qui lyse le virus pour l'inactiver et libérer des acides nucléiques dans la solution. Il n'y a pas besoin d'extraction d'acide nucléique, adapté à l'amplification PCR directe (mais sa capacité de solubilité et de dénaturation est relativement faible par rapport aux sels de guanidine)

Milieu de transport non inactivé

Les milieux de transport non inactivants sont constitués de solvants organiques et de matériaux inertes conçus pour maintenir la viabilité des échantillons cliniques contenant des virus. Ils suppriment la contamination microbienne et protègent les échantillons pendant le transport et le traitement. Les principaux composants d'un milieu de transport viral inactivé sont la solution saline équilibrée de base de Hank. L'amphotéricine B est ajoutée pour inhiber les bactéries et les levures concurrentes. Le tampon HEPES est utilisé pour maintenir le niveau de pH approprié.

La protection personnelle doit être prioritaire car le VTM non inactivant contient des virus/bactéries viables. Il y a un risque que le chercheur soit infecté. Dans le même temps, un transport coûteux dans la chaîne du froid est nécessaire pour une conservation efficace. Il peut être utilisé pour l'isolement de virus, la culture et le développement de vaccins.

Résumé

Bien que les deux moyens de transport servent des objectifs similaires, il existe encore des distinctions fondamentales. Alors que le VTM non inactivé stabilise la viabilité cellulaire/virale et empêche la reproduction bactérienne, le VTM inactivé protège les acides nucléiques des virus et des maladies cellulaires.

Un indicateur de pH est généralement ajouté à la solution pour observer visuellement l'état de la solution (sous différentes valeurs de pH, les couleurs changent).

 Le sel de sodium de Phenol Red (CAS:34487-61-1) est largement utilisé comme indicateur de pH. La solution est rouge en neutre, jaune en acide et violette en alcalin. La solution deviendra jaune si la solution est contaminée par des bactéries et que le pH diminue. Si vous ajoutez du vinaigre à cette solution rouge fuchsia, elle devrait devenir jaune, afin que les amis avec des conditions puissent la tester.

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