Médium M199 en poudre

M199 est particulièrement adapté à la culture de cellules non transformées et est également couramment utilisé en virologie, production de vaccins et culture in vitro d'explants primaires de cellules épithéliales pancréatiques de rat et de tissu cristallin de souris. Comparé à d'autres milieux basaux, le M199 contient des composants uniques, notamment l'adénine, l'adénosine, l'hypoxanthine, la thymine et d'autres vitamines. M199 a deux compositions de sel équilibrées, la composition de sel d'Earle est couramment utilisée dans un environnement CO2, la composition de sel de Hank est utilisée dans un environnement sans CO2. Le milieu 199 ne contient pas de protéines, de lipides ou de facteurs de croissance. Le milieu 199 utilise un système tampon de bicarbonate de sodium (2.2 g/L) et nécessite donc un environnement de 5 à 10 % de CO2 pour maintenir le pH physiologique. Pour une large gamme d'applications de culture cellulaire, nous fournissons des milieux M199 modifiés avec divers composants, ainsi que des milieux M199 avec des composants personnalisables.

Ingrédients du milieu M199 en poudre

Ce milieu de culture cellulaire en poudre sèche M199 doit être complété avec du bicarbonate de sodium, ajusté au pH et filtré pendant la préparation. Le schéma de préparation détaillé est le suivant :

1. Ajouter 950 ml d'eau distillée dans un récipient de mélange aussi près que possible du volume final.
2. Ajouter le milieu sec à l'eau à température ambiante (15°C à 30°C) et agiter doucement. Ne chauffez pas l'eau.
3. Rincez l'intérieur du pack pour éliminer tout résidu de poudre.
4. Ajouter 29.3 ml de solution de NaHCO75 à 3 g/L au milieu.
5. Ajuster le pH à 0.2 à 0.3 unités en dessous du pH de travail final souhaité en ajoutant lentement et en agitant NaOH 1 N ou HCl 1 N. Le pH peut augmenter de 0.1 à 0.3 unité après filtration. Le pH de travail recommandé est de 7.1 à 7.4.
6. Ajuster le volume final avec de l'eau distillée.
7. Traiter immédiatement le milieu à travers la fonction de filtration sur membrane d'un filtre de 0.2 μm dans un récipient stérile à l'aide d'un système de pression positive.